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北京智鼠多寶生物科技有限責任公司
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腦立體定位儀-竹節參總皂苷對不同時間段腦出血模型大鼠腦損傷的保護作用

竹節參總皂苷對不同時間段腦出血模型大鼠腦損傷的保護作用

 

閔靜1,嚴菊華1,敖明章2( 1. 湖北職業技術學院醫學院,湖北孝感432000; 2. 華中科技大學生命科學與技術學院)

 

摘要: 目的研究竹節參總皂苷( TSPJ) 對腦出血大鼠腦損傷不同時間段的影響。方法采用膠原酶法制備腦出血動物模型,將48 只大鼠隨機分為假手術組、模型組、TSPJ 低、高劑量組共4 組,每組12 ; 造模后6h 灌胃給藥,每12h 1 次,于造模后12、72h 測各組大鼠腦組織含水量,超氧化物歧化酶、丙二醛含量,IL-6、TNF-α 水平。結果與模型組比較,72h 高劑量TSPJ 組腦組織含水量減少,超氧化物歧化酶活性增高,丙二醛含量下降,IL-6、TNF-α 水平下降,12h 時TSPJ 高劑量組超氧化物歧化酶活性增高,TNF-α 下降; 丙二醛、IL-6 含量變化不明顯。結論TSPJ 能減輕出血性腦損傷,對受損腦組織發揮保護作用,且有時間依賴性。

關鍵詞: 竹節參總皂苷; 腦出血; 腦水含量

中圖分類號: 965. 1 文獻標識碼: A 文章編號: 2095-4646( 2014) 03-0194-03

 

腦出血( intracerebral hemorrhage, ICH) 是一種急癥重癥,嚴重威脅人們的健康; 腦出血后血凝塊回縮,血腦脊液屏障的破壞,血腫周圍缺血,組織炎癥反應等因素都可造成腦組織的水腫,從而引起功能障礙[1]。竹節參總皂苷( total saponins ofpanax japonicus,TSPJ) 具有**化瘀作用,本實驗通過觀察12h 和72h 兩個時間段TSPJ 對腦出血大鼠腦組織超氧化物歧化酶( SOD) 活性、丙二醛( MDA) 及IL-6、TNF-α 含量的影響,研究其不同時間段的效果及機理。

1 材料與方法

1. 1 實驗動物

健康雄性SD 大鼠,體質量為240 ~ 280g,清潔級,由湖北省動物實驗中心提供,合格證號:SCXK( 鄂) 2011 ~ 012; 分組: 大鼠隨機分為4 組,假手術組、模型組、TSPJ 低劑量組( 100mg /kg) 、TSPJ 高劑量組( 200mg /kg) ,每組12 只,分別觀察術后12、72h 兩個時間點各項指標。TSPJ 組術后6h 灌胃給藥,假手術組及模型對照組灌胃等量生理鹽水,以后12h /次TSPJ 組灌胃給藥,而假手術組及模型對照組灌胃等量生理鹽水,各組飼養條件相同。

1. 2 藥品與儀器

竹節三七樣品采自湖北恩施,采用醇提取法,**稱取樣品50mg,定容于50ml 容量瓶,**吸取樣品液2ml,置50ml 容量瓶中定容,搖勻。由華中科技大學生命科學院天然產物實驗室通過標準品檢測,TSPJ 凈含量為33. 3%,用前配成懸濁液,置4℃ 冰箱保存備用。Ⅶ型膠原酶,美國Sigma公司產品; 注射用尿激酶( 批號03290,南京南大藥業有限責任公司) ,配制成200 IU / L 的溶液;SOD 試劑盒、MDA 試劑盒( 上海恒遠生化試劑有限公司) ; IL-6、TNF-α 試劑盒,北京福瑞生物工程有限公司。儀器: 大鼠腦立體定位儀,微量注射儀購于北京智鼠多寶生物科技有限責任公司; 電子天平( SARTOR2US,BP211D) ,德國生產; GF-D200半自動生化分析儀( 山東高密彩虹分析儀器有限公司) , 8021 離心機( 上海手術器械廠) ; 752 分光

光度儀( 上海精密儀器儀表有限公司) 。

1. 3 模型制備

參照osenberg 等[2]的方法,根據包新民大鼠腦立體定位圖譜[3]確定尾狀核的位置: 術前禁食,自由飲水,大鼠經****( 0. 1ml /100g) 腹腔麻醉俯臥位固定于立體定位儀上,據圖譜調整立體定位儀于注射點,頭皮正中常規**后矢狀位切開約1. 5cm,暴露前囟點,用骨鉆鉆顱打孔( 直徑約1mm) ,用微量進樣器吸取膠原酶2ml,迅速插入已鉆好孔內,進針5mm,注射時間不少于15min,留針10min 后緩慢退針,鉆孔用骨蠟封閉,局部**后,縫合皮膚,假手術組注射2ml 的生理鹽水,手術過程同出血組。

1. 4 檢測方法

1. 4. 1 腦組織含水量測定

分別于術后第12h 及第72h,過量麻醉大鼠,快速斷頭取腦組織,用濾紙吸干腦表面液體和血跡,小塑料封口袋密閉全腦,電子天平稱濕重,然后放入80℃烤箱中,72h 后稱干重。腦含水量計算公式: [( 濕重- 干重) /濕重]× 100%。

1. 4. 2 SOD 活性、MDA 含量測定

各組動物再分兩組分別于術后第12h 及第72h,過量麻醉大鼠,快速斷頭取腦組織,微凍硬后取出,置薄膜隔開的干冰上,分離出血側皮質及基底節,4℃下用預冷的勻漿介質制備成10%的腦勻漿置3000r /min 離心15min 后,取上清液按試劑盒方法操作。SOD 活性測定: 通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子自由基,進而氧化羥胺形成亞硝酸鹽,在550nm 處測其吸光度,通過公式計算。MDA 含量的測定: 通過過氧化脂質降解產物中的MDA 可與硫代***酸縮合,形成紅色產物,在532nm 測吸光度。

1. 4. 3 IL-6、TNF-α 測定

分別于術后第12h 及第72h 手術,取腦勻漿上清液,按放免試劑盒說明書,加入分離劑后充分混勻,放室溫20min,離心,吸上清,生化分析儀上測放射性,以B /T 計算NSB、SO 結合百分率,以B /B0 計算標準及待測樣品結合百分率,并查出樣品值。

1. 5 統計方法

以SPSS 17. 0 統計分析,數據以珋x ± s 表示,各組間比較采用t 檢驗,P 0. 05 為差異有統計學意義。

2 結果

2. 1 TSPJ 對腦水腫的影響

從表1 可見, 12h 時TSPJ 組腦出血后的腦組織含水量無明顯影響, 72h 時高劑量組TSPJ 組腦出血后的腦組織含水量減少,和模型組比較有顯著性差異( P 0. 05) 。

 

 2. 2 TSPJ 對大鼠腦組織SOD 活性、MDA 含量的影響

模型組與假手術組各時間段大鼠腦組織SOD 活性、MDA 含量差異極顯著( P 0. 01 ) ;與模型組比較,TSPJ 高劑量組12h 時SOD 活性有明顯差異( P 0. 05 ) ,MDA 含量無明顯差異,72h 高劑量TSPJ 組SOD 活性增高,差異極顯著( P 0. 01 ) ,MDA 含量下降,差異性顯著( P 0. 05) ,見表2。

 

2.3 TSPJ 對大鼠腦組織中IL-6、TNF-α 含量的影響

與假手術組比較,模型組大鼠IL-6、TNF-α 水平增高,差異有非常顯著性( P 0. 01) ; 與模型組比較,12h 時低劑量組IL-6 無明顯差異,高劑量組TNF-α 有差異( P 0. 05) ,72h 時高劑量TSPJ 組大鼠IL-6、TNF-α 水平下降( P 0. 05) ,見表3。

 

 3 討論

在腦出血的病理發展過程中,腦組織的繼發性損傷是腦出血病情加重、預后不佳的主要因素[4]。出血性腦損傷的炎性反應,由白細胞粘附血管,血-腦屏障遭破壞,炎性細胞侵入腦實質等組成。腦出血時炎性因子表達增加,增加腦水腫、血管壁通透性、炎細胞浸潤。IL-6 介導白細胞與內皮細胞粘附,TNF-α 能促進中性粒細胞浸潤并釋放蛋白水解酶,與神經元損害密切相關[5]。實驗中可以看出TSPJ 組腦出血后的腦組織含水量減少,與模型組有顯著性差異( P < 0. 05) ; 并且72h 時TSPJ 組大鼠腦組織丙二醛含量降低( P <0. 05) ,超氧化物歧化酶的活力增高,高劑量TSPJ組極明顯( P < 0. 01) , 72h 時高劑量TSPJ 組IL-6、TNF-α 水平明顯下降,與模型組有顯著性差異( P< 0. 05) ,推測腦出血12h 內,血腫中的紅細胞破裂或被吞噬細胞吞噬,含鐵血黃素游離,炎細胞浸潤,炎癥反應較明顯,腦出血第72h 血腫經循環吸收**,炎性細胞數量逐漸減少,炎癥因子減少,所以此時血腫變小,炎癥反應減輕,超氧化物歧化酶的活力增高,丙二醛降低, IL-6、TNF-α 水平明顯下降。因而72h 時效果明顯除與**作用有關外,還與**不同發展階段有關,所以****和研究還要考慮不同時間段病變區別及對藥效的影響??偠灾?,TSPJ 能在一定程度上減少損傷時自由基生成,抑制脂質過氧化反應,增加體內自由基**劑如超氧化物歧化酶,減少炎癥因子,從而對顱腦損傷有一定保護作用。

京公網安備 11011502003119號

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